一、虾苗检测有哪些项目？
检测项目内容包括WSSV（对虾白斑综合症病毒）、IHHNV（传染性皮下及造血组织坏死病毒）、EHP（对虾肠孢子虫）、AHPND plasmid（急性肝胰腺坏死综合症毒素质粒）等多项项目
二、对虾孢子虫的生长温度？
对虾孢子虫对温度是极其敏感的，最适宜的生长温度24℃~32℃，而放苗的温度起码温度在18℃以上，温度太低容易引起虾苗活力降低，死亡率高！
放苗温度不稳定也容易引起虾体生长不顺、抵抗力下降，即使虾苗度过苗期，养殖中后期也容易发生生长速度减慢、饲料消耗大，造成养殖成本加大，不利于养殖人员的收益。 所以，投放虾苗，必须关注一下投放虾苗前水体的温度。
三、怎样判断虾有没有孢子虫？
我们应用PCR技术，放大EHP的18SrRNA基因，再用标记地可辛的探针探测原位杂交细胞中被感染的EHP，最后开发新的PCR技术探测对虾组织，排泄物和水中的EHP。
2.材料和方法
2.1对虾
2006年在文莱收集了感染对虾肠孢子虫（EHP）的南美兰对虾。2014年和2015年在越南虾塘里收集了感染EHP的南美白对虾。2014年，从泰国运送了一批南美兰对虾到我们亚利桑那大学的实验室进行隔离检测，这些对虾后来被检测出感染了EHP，它们的肝胰腺，排泄物和水进行了PCR技术取样检测。
为了检测原位杂交（ISH），并通过PCR技术分析EHP的特异性，研究人员使用了具有棉虾病临床症状的斑节对虾样本，这些对虾来自2005年（固定组织）和2006年（冰冻组织）的马达加斯加。还使用了感染了鳄组织变形虫的南美白对虾，这些虾是在2014年收集到的。通过PCR技术分析，肝胰腺组织或者整只对虾被保护在95%的酒精当中或被风干后送往我们实验室。通过原位杂交技术，用戴维森固定法将虾固定。
2.2.DNA提取
从感染EHP的对虾中去除肝胰腺，（4-5只虾）放进一个样本中。装运感染EHP的对虾的虾槽中对排泄物和水进行了取样。利用MicrosepAdvance离心装置（PALL公司）将虾槽里的水浓缩150倍，用于DNA提取。用一种高纯度DNA模板制备工具（RocheBioscience）或Maxwell-16Cell LEV DNA纯化试剂盒（Promega）。
为了测试EHP引物的特异性，PCR扩增检测两种寄生虫病中的DNA：
（1）棉虾病，2006年从马达加斯加收集了斑节对虾，这些虾的肌肉变白，通过rRNA基因测序，发现它们的DNA呈阴性，因为内有类似于匹里虫的微孢子虫（GenBankkp825331号）；
（2）变形虫病，这些南美白对虾大量死亡，通过组织学检查，最后发现这些虾感染了变形虫（种类不确定）。
为了保证EHP引物没有宿主基因组的反应，制备DNA模板：
（1）来自美国夏威夷的无特定病原（SPF）的南美白对虾（>10样本）、斑节对虾（3个样本）；
（2）来自沙特阿拉伯的印度对虾（2个样本）；
（3）在新喀里多尼亚养殖的南美兰对虾（2个样本）；
（4）来自菲律宾的罗氏沼虾（2个样本）；
（5）沙特阿拉伯附近虾塘里采集的蟹（7个样本，未知的物种）；
（6）多毛
四、为什么要检测水中的隐孢子虫？
检测水中的隐孢子虫，主要是为了防止微生物过多对水质产生影响，不同的行业对于水质中微生物检测指标要求也不一样。
另外生活中如果无法对水中微生物进行有效检测，就会造成一些健康问题。尤其是一些食品行业，水中微生物的来源有很多种，其中主要来源于人或动物粪便污染的水体，从而引起可能导致肠道传染病的传播，造成更大的健康隐患，另外水体中微生物过多是也会造成藻类大量生长，造成水中氧气量不足,导致鱼虾因缺氧死亡。因此要定时的对水中微生物进行检测。
五、虾苗孢子虫检测方法？
孢子虫的检测，大多数时候，根据虾苗上的孢囊很大，肉眼就可以进行初步的判断，如果要进一步确诊是哪一类孢子虫引起，就要借助显微镜进行观察。
在调试时，先从400倍开始观察，最后调至高倍。根据极囊、极丝、碘泡进行判定区分。有时发生孢子虫病孢囊很小，大一点的在体表、鳍条上出现如粟米大小的乳白色胞囊，或是寄生在肌肉里，致虾体表高低不平，或有瘤状突起，或是寄生在肌纤维中、颅内、脊柱，后者判定起来比较困难，可结合虾在水中游动是否异常，是否消瘦加以判定。
六、“虾长得慢元凶是肠孢子虫”的可信度有多高？
大家可能有点误解，按我理解，虾生长缓慢原因很多，这个肠胞虫只是一个方面而已，在国内比例有多高还没有人去统计，这个肠胞虫导致的生长缓慢跟EMS没有关联，我确信黄海所的黄首席是肯定在国内检测到这个肠肠虫，确切的说虾这个肠胞虫与我帖子中石斑鱼苗种期间的白便瘦身微孢子虫是同一科的，都属于肠上皮微孢子虫科，但两者不是一个种，这虫在虾上只导致生长缓慢，而在鱼上直接挂掉。
七、对虾孢子虫用什么设备检测？
我们应用PCR技术，放大EHP的18SrRNA基因，再用标记地可辛的探针探测原位杂交细胞中被感染的EHP，最后开发新的PCR技术探测对虾组织，排泄物和水中的EHP。
2.材料和方法
2.1对虾
2006年在文莱收集了感染对虾肠孢子虫（EHP）的南美兰对虾。2014年和2015年在越南虾塘里收集了感染EHP的南美白对虾。2014年，从泰国运送了一批南美兰对虾到我们亚利桑那大学的实验室进行隔离检测，这些对虾后来被检测出感染了EHP，它们的肝胰腺，排泄物和水进行了PCR技术取样检测。
为了检测原位杂交（ISH），并通过PCR技术分析EHP的特异性，研究人员使用了具有棉虾病临床症状的斑节对虾样本，这些对虾来自2005年（固定组织）和2006年（冰冻组织）的马达加斯加。还使用了感染了鳄组织变形虫的南美白对虾，这些虾是在2014年收集到的。通过PCR技术分析，肝胰腺组织或者整只对虾被保护在95%的酒精当中或被风干后送往我们实验室。通过原位杂交技术，用戴维森固定法将虾固定。
2.2.DNA提取
从感染EHP的对虾中去除肝胰腺，（4-5只虾）放进一个样本中。装运感染EHP的对虾的虾槽中对排泄物和水进行了取样。利用MicrosepAdvance离心装置（PALL公司）将虾槽里的水浓缩150倍，用于DNA提取。用一种高纯度DNA模板制备工具（RocheBioscience）或Maxwell-16Cell LEV DNA纯化试剂盒（Promega）。
为了测试EHP引物的特异性，PCR扩增检测两种寄生虫病中的DNA：
（1）棉虾病，2006年从马达加斯加收集了斑节对虾，这些虾的肌肉变白，通过rRNA基因测序，发现它们的DNA呈阴性，因为内有类似于匹里虫的微孢子虫（GenBankkp825331号）；
（2）变形虫病，这些南美白对虾大量死亡，通过组织学检查，最后发现这些虾感染了变形虫（种类不确定）。
为了保证EHP引物没有宿主基因组的反应，制备DNA模板：
（1）来自美国夏威夷的无特定病原（SPF）的南美白对虾（>10样本）、斑节对虾（3个样本）；
（2）来自沙特阿拉伯的印度对虾（2个样本）；
（3）在新喀里多尼亚养殖的南美兰对虾（2个样本）；
（4）来自菲律宾的罗氏沼虾（2个样本）；
（5）沙特阿拉伯附近虾塘里采集的蟹（7个样本，未知的物种）；
（6）多毛类（3个样本），卤虫生物量（9个样本），鱿鱼（2个样本），磷虾（2个样本），这些是从各种商业供应商运送。
2.3.18S rRNA基因扩增和克隆
PCR检测技术，使用了PuReTaqReady-To-Go珠（GE医疗）。扩增18SrRNA基因的引物18S-F（5’-CACCAGGTTGATTCTGCCTGA）和18S-R（5’-TCTGAAATAGTACGGGCGG）。PCR反应中包含200微米dNTP，0.2微米引物，10mM Tris-HCl（pH9.0）,50毫米氯化钾，1.5毫米氯化镁，2.5U Taq DNA聚合酶和1微升提取的DNA（10纳克至100纳克每微升）。放大进行下列循环参数：到达94°C进行初始化3分钟，然后94°C温度下进行30秒，55°C温度下进行30秒，72°C温度下进行1分钟，做35个此循环周期，并在最后一个周期停留在72°C温度下5分钟。在一个含有溴化乙锭的1.2%琼脂糖凝胶中电泳分析PCR产物。在?1KB一带切除和提取DNA，克隆到pGEM-T-easy载体（Promega）上，命名为克隆pEHP-1。通过DNA测序，克隆的插入为1146bp（GenBankNo.kp759285）。国家生物技术信息中心（NCBI）使用BLAST序列数据库对GenBank的相似序列进行了搜索。
2.4、探针标记和原位杂交
克隆pEHP-1质粒DNA被用来做成原位杂交时的一个探针。Mari等人描述，在PCR反应中，使用了digoxigenin-11-dutp（Roche）标记的基因探针（1998）。用于标记反应的引物EHP-F（5’-GGGAACGACGAACGGCTCAG）和EHP-R1（5’-TGCCTTGATGAGACACTGTT）产生一个1.1 kb的片段。digoxigenin标记的DNA探针，用乙醇沉淀，悬浮在水中，并存储在-20°C。棉虾病，感染了类似于匹里虫的微孢子虫的探针如微孢子虫，是从一个克隆的16SRNA基因区域产生。
戴维森的AFA固定虾进行了处理，石蜡包埋，按照标准方法切片（4微米厚）（莱特纳，1996）。经过脱蜡，水化，蛋白酶K消化，和后固定，切片浸泡在用500微升的杂交液中（4×SSC，50%甲酰胺，1×登哈特的溶液，5%硫酸葡聚糖，0.5微克/毫升鲑鱼精DNA），这种杂交液中含有EHP探针含（0.2μg/ml）。切片放在90°C加热表面上10min，然后在42°C温度下进行一夜的杂交。最终采用硝基蓝四氮唑，5-溴-4-磷酸进行检测抗地高辛抗体共轭碱性磷酸酶（罗氏）。
2.5.EHP的PCR检测。
PCR检测技术，使用了PuReTaqReady-To-Go珠（GE医疗）。探测EHP的引物是EHP-510F(5’-GCCTGAGAGATGGCTCCCACGT)和EHP-510R(5’-GCGTACTATCCCCAGAGCCCGA)。放大进行下列循环参数：到达94°C进行初始化3分钟，然后94°C温度下进行30秒，60°C温度下进行30秒，72°C温度下进行30秒，做35个此循环周期，并在最后一个周期停留在72°C温度下5分钟。
3.结论与讨论
3.1临床症状与EHP感染史
目前，养殖对虾过程中所发生的EHP感染还没有特定的的临床症状。EHP感染通常与发育不良和死亡率上升有关。根据越南境内的鱼塘数据（虾农个人提供的数据）：把感染后的虾苗放入虾塘后的前25天时间内，对虾生长速度正常，之后，对虾的健康状况开始恶化；受感染的对虾饲料进食量减少（50-70%），肝胰脏变色。对虾受到感染之后，其体型（即重量，每周进行一次称重）仅为健康对虾的10-40%。对虾EHP感染死亡率并非一成不变，根据养殖场统计，对虾每天的死亡率约为1?2%。在实验室测定过程中，对虾EHP死亡率并无显著上升，（Tangprasittipap，2013），由于测定持续周期较短（7天），有可能无法检测出死亡率的大幅变化。情况较为严重的EHP感染可能会增加其他细菌感染的易感性。我们发现，在某些情况下，EHP通常伴有弧菌机会性感染（也称为感染性肝胰腺坏死），这可能会导致增加对虾死亡率。
