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金针菇组织培养(金针菇组织培养实验)

来源:www.yangzhi8.com.cn   时间:2023-05-17 04:09   点击:196  编辑:admin   手机版

一、组织培养原理?

植物组织培养即植物无菌培养技术,又称离体培养,是根据植物细胞具有全能性的理论,利用植物体离体的器官(如根、茎、叶、茎尖、花、果实等)、组织(如形成层、表皮、皮层、髓部细胞、胚乳等)或细胞(如大孢子、小孢子、体细胞等)以及原生质体,在无菌和适宜的人工培养基及温度等人工条件下,能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根,最后形成完整的植株的学科。

二、草莓组织培养?

组织培养技术 1.培养程序和培养基 5--6月于晴天的下午在健壮、无病的草莓刚抽出的匍匐茎上取茎尖,大小为0.3--0.4mm,作为组织培养的外植体。

用于草莓茎尖培养诱导芽分化的基本培养基为MS,附加6--BA0.5mg/L,NAA0.2mg/L,蔗糖30g/L,琼脂粉6.5g/L,pH值调至5.8--6.0。在草莓茎尖的扩大繁殖阶段,采用MS培养基附加6-BA0.5mg/L、NAA0.01mg/L。扩大繁殖主要是将丛生苗分块即每5--7株切成一块,转入继代培养基。在转苗过程中,去掉原生叶片有利于新苗分化,在扩大繁殖中随时清除愈伤组织,有利于新苗增殖和生长。诱导生根培养基用1/2MS附加不同浓度IBA。试验表明:以IBA0.1mg/L的浓度处理的生根率最高,为100%,平均根条数为2.4条。不加IBA及IBA浓度超过0.2mg/L,多数苗都是先于苗基切口处产生愈伤组织,随后在愈伤组织上分化生根,致使成活率大大降低。2.操作技术要点及培养条件 (1)灭菌与接种 预处理 为了灭菌彻底,常把接种材料先进行湿润处理,使灭菌剂能顺利地渗入材料。可用多种湿润剂,我们采用的是75%的酒精,湿润的时间为半分钟至1分钟。灭菌处理 在草莓组织培养中常用灭菌剂的种类很多。我们曾用过次氯酸钠10%水溶液(含有效氯0.4--0.5%),浸泡接种材料10--15分钟;次氯酸钙(漂白粉),用其饱和上清液,浸泡接种材料15--30分钟;过氧化氢10--12%水溶液浸泡10--20分钟;新洁尔灭5--10%水溶液,浸泡10--15分钟;升汞0.1%水溶液,浸泡8--10分钟。其中前4种灭菌剂对接种材料比较安全,但因灭菌时间较长,常常使接种材料的外层氧化变褐,以致影响培养效果。升汞有很强的杀菌能力,但浸泡时间稍长会造成接种材料中毒。因此,在草莓组织培养中,如把握好时间,升汞是应用较多的灭菌剂。灭菌后的接种材料,要用无菌水充分清洗,通常要换水3--5次。接种 以培养无病毒苗为主要目的的草莓组织培养,所接种的茎尖材料很小,在接种时首先要求准确熟练地剥取茎尖生长点,并使用固体培养基比较适宜,接种时应注意不能将整个茎尖埋入培养基中。培养基须用1--1.1大气压热压灭菌20分钟。从材料接种到生根苗长成,这期间的培养温度一般应稳定在25±2℃。每日光照12小时,光强发2000Lx为宜。培养室温度在18--26℃范围内,瓶苗可以正常生长及发根,但在28℃以上时,绿苗普遍变黄,生根率降低,根尖发黄老化,幼苗易产生玻璃化现象。组培苗的移栽技术 1.移栽技术 试管苗的苗龄为15天,主根长1.5cm左右,白色无须根,移栽成活率可达90%--100%。移栽前要将培养瓶从培养室中取出置于自然条件下,打开瓶盖进行透气锻炼。24小时后,从瓶中取出幼苗,清除干净根部及根颈处的培养基,栽入苗圃或穴盘中进行驯化。基质可采用经过灭菌处理的腐熟的锯木屑或腐叶土,也可采用经过灭菌处理的由蛭石与珍珠岩按体积计以1:1比例配成的混合物,或园土与煤渣按体积计以2:1比例配制成的混合物。2.提高移栽成活率的关键 选择不定根直接生自茎基,根多且粗壮,叶片在3片以上,叶大、厚、深绿的生根苗,成活率普遍较高。栽培基质要用清水冲洗干净,或用多菌灵或甲基托布津掺拌灭菌,用煤渣作基质时,还要用0.2%冰乙酸中和使碱性降低。移栽时采取“深栽浅埋”。深栽就是在移栽时根要栽得深,浅埋的标准是使小苗的根颈与土表平齐,或略高于土表。注意控制光照与温度、湿度。小苗移栽后,放在温室内或塑料拱棚内培养,温度控制在15--20℃,湿度维持在80%左右为宜。同时由于刚移栽的小苗茎杆脆嫩,应尽量采用喷雾状浇水,水量也不宜过大,落干后再喷。遮光50%,一周后,可逐渐增强日光照射。

三、组织培养的步骤?

植物组织培养的流程:

第一步,将采来的植物材料除去不用的部分,将需要的部分仔细洗干净,如用适当的刷子等刷洗。把材料切割成适当大小,即灭菌容器能放入为宜。置自来水龙头下流水冲洗几分钟至数小时,冲洗时间视材料清洁程度而宜。易漂浮或细小的材料,可装入纱布袋内冲洗。

流水冲洗在污染严重时特别有用。洗时可加入洗衣粉清洗,然后再用自来水冲净洗衣粉水。洗衣粉可除去轻度附着在植物表面的污物,除去脂质性的物质,便于灭菌液的直接接触。当然,最理想的清洗物质是表面活性物质—吐温。

第二步是对材料的表面浸润灭菌。要在超净台或接种箱内完成,准备好消毒的烧杯、玻璃棒、70%酒精、消毒液、无菌水、手表等。用70%酒精浸10~30秒。由于酒精具有使植物材料表面被浸湿的作用,加之70%酒精穿透力强,也很易杀伤植物细胞,所以浸润时间不能过长。

有一些特殊的材料,如果实、花蕾、包有苞片、苞叶等的孕穗,多层鳞片的休眠芽等等,以及主要取用内部的材料,则可只用70%酒精处理稍长的时间。处理完的材料在无菌条件下,待酒精蒸发后再剥除外层,取用内部材料。

第三步是用灭菌剂处理。表面灭菌剂的种类较多,可根据情况选取1~2种使用见表。第四步是用无菌水涮洗,涮洗要每次3min左右,视采用的消毒液种类,涮洗3~10次左右。

无菌水涮洗作用是免除消毒剂杀伤植物细胞的副作用注意:①酒精渗透性强,幼嫩材料易在酒精中失绿,所以浸泡时间要短,防止酒精杀死植物细胞。②老熟材料,特别是种子等可以在酒精中浸泡时间长一些,如种子可以浸泡5分钟。③升汞的渗透力弱,一般浸泡10分钟左右,对植物材料的杀伤力不大。④漂白粉容易导致植物材料失绿,所以对于幼嫩材料要慎用。⑤在消毒液中加入浓度为0.08~0.12%的吐温20或80(一种湿润剂),可以降低植物材料表面的张力,达到更好的消毒效果。

四、植物组织培养选材?

外植体的年龄:一般情况外植体的年龄越小,分化的程度越小,组培的成功率就越高,因此,尽量选择幼嫩的植物组织或器官作为外植体。

外植体的大小:外植体很小和很大都不合适,很小的外植体极容易死亡,很大的外植体不容易消毒,因此,要选择大小适中的外植体。例如,如果用菊花的芽进行组培,选取的芽可为3mm左右。外植体所在的部位:一般选择植物的芽尖、根尖或幼嫩的茎作为外植体,这些部位的组织分裂能力强,容易形成愈伤组织。外植体的外观形态:由于外植体的消毒工作非常重要,因此,要选择哪些表面相对光滑容易消毒的的比较好…就是这些啦!

五、组织培养繁殖技术?

把含有营养物质及植物生长物质的培养液中,培养离体植物组织(器官或细胞)并诱导使其长成完整植株的技术,就是组织培养繁殖技术

六、植物组织培养途径?

1.外植体(被培养的组织块--叶片碎片、茎尖、幼胚等或细胞--去壁的叶肉细胞)细胞恢复分裂,形成大量的细胞--愈伤。这个过程是脱分化。由于是已经成熟的细胞脱离了成熟细胞的状态,回到类似胚胎阶段的状态,故称脱分化。

七、山慈菇组织培养方法?

1.栽培可在10月~12月播种,每亩用种量50克,参考株行距40厘米×50厘米,不要连作,应水旱轮作。

2.采用高垄定植,保持沟渠通畅,防止田间渍谁水。

3.重施有机肥,每亩施腐熟农家肥3000~4000公斤、茶饼肥150公斤和磷、钾肥100公斤,

4.定植后施稀粪水2~3次,第一批果实坐稳后及每次采收后追肥一次,

八、组织培养技术流程?

零阶段 母本的选择和处理  

在组培实验开始前,必须慎重选择母本材料。母本的品种/物种特性要典型,没有任何病害迹象。需要考虑对母本材料进行一定处理,以降低stage 1 的外植体污染率。适当的环境条件或化学试剂处理有可能提升后续组培阶段的生长、形态发生和增殖率,例如一定的高温处理、细胞分裂素和/或赤霉素的喷施。对母本可能携带的细菌和病毒进行检测是商业化植物组织培养的必要环节,但常常被忽略了。

第一阶段 无菌培养体系的建立

本阶段主要是建立起外植体的无菌培养体系。成功的标志是外植体没有微生物污染,并且有一定的生长,例如茎尖的生长或愈伤组织的形成。本阶段通常会有大量的外植体接种,经过短期培养应该将有污染出现的培养容器丢弃掉,不再继续培养。本阶段只要获得目标数量的无污染,其表现生长的外植体即可,不需要100%的成功率。

 

第二阶段 繁殖体的增殖

本阶段主要目标是扩增繁殖体的数量。例如,侧芽的生长,不定芽的产生,体细胞胚的形成和微型储藏器官(块茎和鳞茎)的形成。本阶段产生的繁殖体通常再次进入增殖循环中,以扩增到需要的数量。

 

第三阶段 移栽前培养

Stage Ⅱ产生的小苗或者芽(shoots)通常不具备在基质中自主生长的能力。在stage Ⅲ,需要通过一些培养措施使得这些小苗产生足够的光合能力。有些植物需要在stageⅢ进行特殊处理以避免生长停滞或休眠。

生根培养是stage Ⅲ的重要工作。通常需要将芽转入生根培养基中进行生根。有的情况下,在生根培养前,需要将芽培养到足够的长度。为了降低成本,有很多实验室会将未生根的芽转出组培瓶外进行生根培养。

 

第四阶段 移栽驯化

本阶段为组培苗从组培瓶转入温室驯化培养。本阶段至关重要,如果操作不当,会造成大量损失。主要的原因有两个:

1. 组培苗容易失水死亡。组培苗通常在高湿度和低光强条件下培养,叶片表面的蜡质未形成。组培苗的气孔在遇到湿度降低时可能不会闭合。以上原因会导致组培苗在移栽后迅速失水死亡。

2. 组培苗以蔗糖为碳源且处于低光强下,光合能力较弱。如果在移栽后短时间内不能形成光合能力,也会出现死亡。

通常组培苗从组培容器中取出后需要洗净根上的琼脂,转入移栽基质中。在驯化早期,需要高湿度和低光强的条件,随后逐渐减低湿度和增加光强,直到适应温室环境。

九、什么是组织培养?

组织培养是一种生物学实验方法,用于培养和繁殖植物、细菌、真菌、动物等生物组织或细胞,以便进行研究和应用。

这种培养方法可以在人工控制的环境下,提供组织所需的营养、水分和光照条件,从而促进组织生长和发育。

组织培养技术广泛应用于农业、医学、生物工程和植物育种等领域,可用于增加植物种苗产量、培养新的生物材料、研究生物代谢和遗传基础等。

在医学研究中,组织培养技术可用于培育并研究人体细胞和组织,以探究疾病的发生和发展机制,为疾病治疗提供依据。总之,组织培养技术在现代生物学研究和应用中发挥着重要作用。

十、植物组织培养说明了什么,植物组织培养的意义?

通过组织培养得到的植物体的特点:组织培养得到的植物体的遗传物质与原植物体的遗传物质完全相同,表现出的性状完全一样(排除基因突变等情况)。需要注意的是如果用亲本的花粉进行组织培养,那么得到的植株会是单倍体,单倍体的遗传物质自然也就比用体细胞培养的植株的遗传物质减少一半。植物组织培养的实质是:基因的选择性表达。

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